酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于多孔板的技术，用于确定生物样品中的抗体、抗原或其他蛋白质的浓度，使用发色、荧光或发光的读数。自20世纪60年代开发以来，它们已成为许多诊断和生物医学研究实验室的主力军，在一系列应用中表现出特异性、灵敏度和可重复性。使用ELISA有很多优点，但必须适当设置和优化，以确保结果可靠。
　　生产抗体的公司确保ELISA实验成功的方法技术大盘点如下：
　　一、提前规划
　　提前规划可以帮助工作流程有效运行，并减少错误和重测的可能性；因此，有必要在工作流程开始前彻底规划工作流程的所有组成部分。流程图和检测设计是重要的规划考虑因素。需要确定的因素包括：待测样品的数量、复测次数和所需的试剂平板/试剂盒的数量。
　　ELISA样品的复测是很重要的，因为这将突出异常的结果。为提高可靠性，最好使用三份样本，但必要时也可使用重复样本。方案中还需要考虑到质控，因为这将表明检测是否成功，是否保持在动态范围内，并能进行检测间的比较和校正。使用流程图来计划你的ELISA检测也将有助于减少任何样品位置的错误。
　　当使用不同的试剂在多个平板或多个检测上进行时，所有的平板都需要有明确的标签和试剂的隔离，以避免混淆。此外，所有的试剂必须彻底解冻（如果需要的话），在使用前进行混合并注明日期，并检查任何光敏试剂是否变质。
　　另一个需要考虑的因素，特别是对于夹心法来说，就是一抗和二抗所来自的物种。当使用抗体对时，必须对它们进行测试以找到最理想的信号，并尽量减少任何交叉反应。
　　许多市面上的试剂盒提供了抗体，然而，如果一个项目涉及到一个新的目标，那么针对已知和未知的样品测试一系列的抗体是很重要的。在优化检测时，尝试不同的抗体稀释度以提高检测的灵敏度，同时尽量减少交叉反应和背景噪音。尝试一系列的样品稀释度也可以帮助这个过程。
　　封闭是工作流程的另一个关键部分，它能减少背景信号并将假阳性结果降至最低。一个好的封闭缓冲液将减少非特异性结合，同时不与（或只与最小的）所用的抗原、抗体或检测试剂发生反应。
　　封闭缓冲剂通常是蛋白质或非离子型洗涤剂，所用的类型取决于几个因素，包括所用的抗体、抗原和洗涤剂试剂以及平板的表面化学性质。
　　最常见的封闭剂类型，牛血清白蛋白（BSA），是一种蛋白质。如果你的背景信号很高，你怀疑封闭不足，使用更高浓度的封闭剂或增加封闭时间可能有帮助。相反，如果你有一个持续的背景问题，可能值得投入时间来优化你所使用的封闭剂类型。
　　二、样品处理和移液技术
　　试剂和样品处理不当或储存不正确会影响下游分析，因为不同的缓冲剂和试剂会有不同的储存要求。例如，有些必须储存在冰箱里，有些在室温下，有些用感光罩（如铝箔）。
　　如果有计划在未来的实验中使用相同的样品，那么应该把它们放入等分试样中，需要时再取出来。这将避免多次冷冻/解冻循环，保持准确的结果。当样品准备使用时，应在冰上解冻（或根据方案）。移液技术注意事项要点如下：
　　1. 移液时，枪头应对准孔，避免接触孔壁及底部。
　　2. 移液后轻轻晃动混匀试剂。
　　3. 如果您的样品具有黏性，请预先润洗枪头以消除表面张力的影响。吸液时等待片刻使体积平衡后再取出。
　　4. 移液不充分或移液体积不均，说明移液器需要校正。必要时请检查移液器并重新校正。
　　5. 加样时，不同的试剂标准品和样本间都要确保更换枪头，避免交叉污染。
　　6. 确保使用合适的枪头。不合适的枪头无法正确量取吸液和加样的体积。