筛选超低岩藻糖细胞系的方法和应用与流程

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筛选超低岩藻糖细胞系的方法和应用与流程

时间:2022-08-29 21:45:00 阅读:108
  使CHO细胞的FUT8基因发生缺失或突变,进而使其产生岩藻糖的通路受阻,用此细胞株表达的抗体或IgG-Fc融合蛋白岩藻糖含量明显减少,且ADCC活性功能显著提高。技术背景本发明所用TALEN(TranscriptionActivator-LikeEffectorNuclease)是一种人工改造的限制性内切酶,是将TALE的DNA结合域与限制性内切酶(FokⅠ)的DNA切割域融合而得到。由于TALE的DNA结合域中的重复氨基酸序列模块可以与单碱基发生特异性结合,因此理论上可以任意选择靶DNA序列进行改造,是一种非常有效的基因组改造工具酶。TALEN在细胞中与基因组的靶位点结合,形成二聚体发挥内切酶活性,导致左右TALEN的spacer区域发生双链DNA断裂(DSB,Double-StrandBreaks),从而诱发DNA损伤修复机制。细胞可以通过非同源性末端接合机制(NHEJ,Non-homologousEndJoining)修复DNA。NHEJ修复机制并不精确,极易发生错误(缺失/插入),从而造成移码突变,因此可以达到基因敲除的目的。
FUT8 细胞系在生物医药领域,已经有很多研究将此技术应用到宿主细胞的改造,来提高宿主细胞生产蛋白的质量和活性。本发明在其某些实施方式中涉及中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,产生该细胞系的方法及其应用。重组的治疗性抗体或IgG-Fc融合蛋白在治疗各种各样疾病中已发挥了重要作用。估计下一个十年中可能约30%新出现的药物基于抗体。已批准了30种重组抗体和Fc融合物进入市场,2008年销售额达到350亿美元。抗体含有由重链和轻链可变区组成的靶抗原特异性区域。抗体的这个部分可结合和中和可溶性靶抗原或膜结合的靶抗原。Fc部分通过抗体依赖的细胞毒(ADCC)机制、补体依赖的复合体和新生受体FcRn机制负责效应器功能。通过效应分子与铰链区和Fc的CH2区的相互作用介导了这些效应器功能。
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